小分子陽離子脂質遞送系統(tǒng)設計及其應用研究

1 非病毒基因遞送系統(tǒng)概述 001
1.1 基因治療與基因載體 003
1.2 陽離子聚合物類基因載體 004
1.3 陽離子脂質體類基因載體 005
1.3.1 頭尾型陽離子脂質研究進展 007
1.3.2 雙子型陽離子脂質研究進展 014
1.3.3 啞鈴型陽離子脂質研究進展 016
1.4 陽離子脂質體介導的基因轉染過程 019
1.5 基因轉染障礙及提高轉染效率的方法 020
1.5.1 DNA 的壓縮 020
1.5.2 細胞結合及細胞攝取 021
1.5.3 內涵體逃逸 022
1.5.4 核傳輸及DNA 的釋放 024
1.5.5 多種方法的綜合應用 025
1.6 細胞內刺激響應型載體研究 025
1.6.1 pH 響應型載體 025
1.6.2 氧化還原響應型載體 025
1.6.3 ROS 響應型載體 026
1.6.4 ATP 響應型載體 026
1.6.5 酶響應型載體 027
1.7 展望 027
參考文獻 028

2 基于Cyclen 親水頭部的頭尾型陽離子脂質非病毒基因載體 031
2.1 引言 033
2.2 目標陽離子脂質的合成 034
2.3 酸堿緩沖能力測定 035
2.4 脂質體和脂質體/DNA 復合物的形成及表征 036
2.4.1 DOPE 比的篩選 036
2.4.2 脂質體與DNA 的相互作用 038
2.4.3 平均粒徑和表面電位 039
2.4.4 TEM 表征 041
2.5 體外細胞毒性 042
2.6 體外基因轉染 043
2.6.1 綠色熒光蛋白表達實驗 043
2.6.2 熒光素酶實驗 044
2.6.3 鈣離子調節(jié)的體外轉染 044
2.7 轉染機理研究 046
2.7.1 細胞流式實驗 046
2.7.2 激光掃描共聚焦顯微實驗 047
參考文獻 049

3 基于Cyclen 親水頭部的雙子型陽離子脂質非病毒基因載體 051
3.1 引言 053
3.2 目標雙子型陽離子脂質的合成 053
3.3 脂質體與DNA 的相互作用 055
3.4 體外細胞毒性 058
3.5 體外基因轉染 058
3.6 轉染機理考察 060
3.7 鈣離子優(yōu)化轉染效果 062
3.8 透明質酸形成的三元復合物 062
參考文獻 069

4 對稱的啞鈴型陽離子脂質非病毒基因載體 071
4.1 引言 073
4.2 目標啞鈴型陽離子脂質的合成 075
4.3 啞鈴型陽離子脂質體的制備及其與DNA 的相互作用 076
4.3.1 啞鈴型陽離子脂質體的制備 076
4.3.2 啞鈴型陽離子脂質體與DNA 的相互作用 077
4.3.3 啞鈴型陽離子脂質體及其復合物的物理化學性質表征 079
4.4 體外細胞毒性 082
4.5 體外基因轉染 083
4.6 轉染機理研究 086
參考文獻 090

5 功能化的不對稱的啞鈴型兩親性分子非病毒基因載體 091
5.1 引言 093
5.2 不對稱的啞鈴型兩親性分子的合成 094
5.3 啞鈴型脂質體與DNA 的相互作用 095
5.4 體外細胞毒性 098
5.5 體外轉染實驗 100
5.6 轉染機理研究 102
5.6.1 細胞攝取效率及內吞途徑 102
5.6.2 pH 敏感特性和內涵體逃逸實驗 105
參考文獻 107

6 功能化的不對稱的啞鈴型兩親性分子在藥物遞送中的研究 109
6.1 引言 111
6.2 啞鈴型兩親性分子的自組裝性質 112
6.2.1 臨界聚集濃度 112
6.2.2 粒徑電位和形貌 113
6.3 阿霉素的包裹 114
6.4 阿霉素在細胞內的釋放情況 115
6.5 體外抗腫瘤效應 119
參考文獻 122

7 基于Cyclen-鋅離子配合物的脂質作為非病毒基因載體的研究 123
7.1 引言 125
7.2 陽離子脂質和對應鋅配合物的合成 127
7.3 Zn-Cyclen 配合物與DNA 的相互作用 127
7.4 體外細胞毒性 130
7.5 體外基因轉染 132
7.6 體外轉染機理研究 133
參考文獻 137