精編分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南（第四版）

中譯本序
前言
參編人員 致謝
第1章 大腸桿菌、質(zhì)粒和噬菌體
1.1 培養(yǎng)基及常用工具的準(zhǔn)備
1.2 在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)
1.3 在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)
1.4 經(jīng)典細(xì)菌遺傳學(xué)選論
1.5 質(zhì)粒圖譜
1.6 質(zhì)粒DNA的小量制備
1.7 質(zhì)粒DNA的大量制備
1.8 將質(zhì)粒DNA導(dǎo)入細(xì)菌細(xì)胞
1.9 λ噬菌體概述
1.10 作為克隆載體的λ噬菌體
1.11 λ噬菌體鋪平板產(chǎn)生噬斑
1.12 培養(yǎng)λ衍生的噬菌體載體
1.13 從噬菌體裂解液中制備λDNA
1.14 源于絲狀噬菌體的載體
1.15 M13噬菌體衍生載體的制備和應(yīng)用
第2章 DNA的制備和分析
2.1A 水溶液中DNA的純化和濃縮
2.1B 陰離子交換色譜法純化DNA
2.2 從哺乳動物組織中制備基因組DNA
2.3 從植物組織中制備基因組DNA
2.4 從細(xì)菌中制備基因組DNA
2.5A 瓊脂糖凝膠電泳
2.5B 脈沖場凝膠電泳
2.6 從瓊脂糖凝膠中分離和純化大的DNA限制性酶切片段
2.7 用常規(guī)的凝膠電泳分離小分子DNA片段
2.8 DNA的毛細(xì)管電泳
2.9A Southern印跡法
2.9B DNA的斑點(diǎn)和狹線印跡
2.10 DNA印跡的雜交分析
2.11 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳純化寡核苷酸
第3章 DNA和RNA的酶學(xué)操作
3.1 限制性內(nèi)切酶消化DNA
3.2 用多種酶消化進(jìn)行DNA作圖
3.3 用限制酶部分消化進(jìn)行DNA作圖
3.4 核酸操作的常用試劑和放射性同位素
3.5 依賴于DNA的DNA聚合酶
3.6 不依賴于模板的DNA聚合酶
3.7 依賴RNA的DNA聚合酶
3.8 依賴DNA的RNA聚合酶
3.9 不依賴DNA的RNA聚合酶
3.10 磷酸酶和激酶
3.11 外切核酸酶
3.12 內(nèi)切核酸酶
3.13 核糖核酸酶
3.14 DNA連接酶
3.15 RNA連接酶
3.16 DNA片段的亞克隆
3.17 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)構(gòu)建重組DNA
3.18 非同位素探針的標(biāo)記和比色檢測
3.19 非同位素探針的化學(xué)發(fā)光檢測
第4章 RNA的制備和分析
4.1 從組織培養(yǎng)細(xì)胞中提取細(xì)胞質(zhì)RNA
4.2 異硫氰酸肌法制備總RNA
4.3 酚/SDS法制備植物RNA
4.4 制備細(xì)菌RNA
4.5 poly（A）+RNA的制備
4.6 用單鏈DNA探針進(jìn)行mRNA的S1核酸酶作圖分析
4.7 核酸酶保護(hù)試驗(yàn)
4.8 引物延伸
4.9 RNA的Northern印跡和狹線雜交分析
第5章 重組DNA文庫的構(gòu)建
5.1 基因組DNA文庫概述
5.2 cDNA文庫概述
5.3 噬菌體文庫的擴(kuò)增
5.4 黏粒和質(zhì)粒文庫的擴(kuò)增
第6章 重組DNA文庫的篩選
6.1 噬菌體文庫的鋪平板和轉(zhuǎn)移
6.2 黏粒及質(zhì)粒文庫的鋪平板和轉(zhuǎn)移
6.3 應(yīng)用DNA片段作探針
6.4 使用合成寡核苷酸作探針
6.5 噬菌體克隆的純化
6.6 黏粒和質(zhì)粒克隆的純化
6.7 在λ噬菌體噬斑中產(chǎn)生的融合蛋白的免疫篩選
6.8 在雜交選擇和翻譯后進(jìn)行的免疫篩選
6.9 概述篩選YAC文庫和分析YAC克隆的策略
6.10 對分離得到的YAC克隆的分析
第7章 DNA序列測定
7.0 DNA測序方法概述
7.1 DNA測序策略
7.2 構(gòu)建用于DNA測序的嵌套式缺失突變體
7.3 制備DNA測序模板
7.4 雙脫氧法DNA測序
7.5 化學(xué)發(fā)光雙脫氧DNA測序法
7.6 用于測序的變性凝膠電泳
7.7 DNA和蛋白質(zhì)序列的計(jì)算機(jī)處理和分析
第8章 克隆化DNA的誘變
8.1 無需表型選擇的寡核苷酸介導(dǎo)的誘變
8.2A 用簡并寡核苷酸在小段DNA序列中產(chǎn)生大量突變
8.2B 基因合成：用互為引物的長段寡核苷酸合成目的的序列
8.3 區(qū)域頭分區(qū)誘變
8.4 DNA的接頭分區(qū)誘變
8.5 利用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）的定點(diǎn)誘變
第9章 DNA導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞
9.1 磷酸鈣轉(zhuǎn)染法
9.2 利用DEAE-葡聚糖的轉(zhuǎn)染
9.3 電穿孔轉(zhuǎn)染發(fā)
9.4 脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染
9.5 被轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞的選擇
9.6 遺傳報(bào)道基因系統(tǒng)概述
9.7A 報(bào)道基因活性的同位素分析方法
9.7B 非同位素分析報(bào)道基因活性
9.8 反轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)概述
9.9 建立特異的反轉(zhuǎn)錄病毒產(chǎn)毒細(xì)胞系
9.10 制備高滴度反轉(zhuǎn)錄病毒上清的瞬時轉(zhuǎn)染方法
9.11 大規(guī)模制備和濃縮反轉(zhuǎn)錄病毒原液
9.12 反轉(zhuǎn)錄病毒原液中輔助病毒的檢測
9.13 用反轉(zhuǎn)錄病毒在體外及體內(nèi)感染細(xì)胞
第10章 蛋白質(zhì)分析
10.1 蛋白濃度測定
10.2 蛋白質(zhì)的單向SDS凝膠電泳
10.3 使用O'Farrell系統(tǒng)的雙向凝膠電泳
10.4 凝膠中蛋白的染色
10.5 免疫印跡和免疫檢測
10.6 凝膠過濾層析
10.7 離子交換層析
10.8 免疫親和層析
10.9 金屬螯和親和層析
10.10 肽的反相分離
10.11 通過表位標(biāo)簽純化重組蛋白
10.12 免疫沉淀
10.13 克隆化基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯
10.14 氨基酸代謝標(biāo)記
10.15 分離蛋白質(zhì)用于微量序列分析
第11章 免疫學(xué)
11.1 酶與抗體的偶聯(lián)
11.2 酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）
11.3 單克隆抗體上清液和腹水的制備
11.4 單克隆抗體的純化
11.5 兔多克隆抗血清的制備
11.6 從抗血清、腹水或雜交瘤上清液中純化IgG抗體
11.7 免疫原性肽的選擇
11.8 抗肽抗體的制備
第12章 DNA-蛋白質(zhì)相互作用
12.1 從哺乳動物細(xì)胞中制備核提取物和細(xì)胞質(zhì)提取物
12.2 DNA結(jié)合蛋白在凝膠電泳中的遷移率變動分析
12.3 甲基化干擾分析法和尿嘧啶干擾分析法
12.4 DNA酶Ⅰ足跡分析法
12.5 蛋白質(zhì)與核酸的紫外交聯(lián)
12.6 用生物素/鏈親和素親和系統(tǒng)純化DNA結(jié)合蛋白
12.7 編碼DNA結(jié)合蛋白的cDNA的檢測、純化和鑒定
12.8 用體外合成的蛋白質(zhì)分析DNA蛋白質(zhì)相互作用
12.9 序列特異性DNA結(jié)合蛋白的親和層析純化
12.10 PCR輔助結(jié)合位點(diǎn)選擇確定蛋白質(zhì)-DNA序列特異性
第13章 釀酒酵母
13.1 酵母菌培養(yǎng)基的制備
13.2 酵母菌的培養(yǎng)與操作
13.3 酵母菌細(xì)胞的誘變
13.4 酵母菌的克隆載體與基因
13.5 酵母菌表達(dá)載體
13.6 酵母菌載體與表達(dá)產(chǎn)物的檢測
13.7 將DNA導(dǎo)入酵母菌細(xì)胞中
13.8 利用互補(bǔ)作用克隆酵母菌基因
13.9 從酵母細(xì)胞中分離除去質(zhì)粒
13.10 克隆化酵母DNA的操作
13.11 酵母DNA的制備
13.12 酵母菌RNA的制備
13.13 制備酵母蛋白抽提物
第14章 原位雜交和免疫組織化學(xué)
14.1 組織、胚胎及單細(xì)胞的固定、包埋及切片
14.2 冰凍切片
14.3 細(xì)胞RNA的原位雜交
14.4 雜交探針的檢測
14.5 放射自顯影原位雜交玻片的復(fù)染和壓片固定
14.6 免疫組織化學(xué)法
14.7 用非同位素進(jìn)行原位雜交和檢測
14.8 低豐度核酸的檢測：原位PCR和雜交
第15章 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）
15.1 PCR擴(kuò)增DNA：標(biāo)準(zhǔn)程序和優(yōu)化
15.2 利用PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行DNA序列測定
15.3 通過PCR方法對微量DNA進(jìn)行定量分析
15.4 PCR擴(kuò)增RNA
15.5 用于基因組測序及足跡分析的連接介導(dǎo)PCR
15.6 利用單側(cè)PCR（錨式PCR）進(jìn)行cDNA擴(kuò)增
15.7 PCR產(chǎn)物的分子克隆
15.8 通過PCR差異顯示mRNA
第16章 蛋白質(zhì)的表達(dá)
16.1 概述：蛋白質(zhì)在大腸桿菌中的表達(dá)
16.2 T7噬菌體RNA聚合酶/啟動子表達(dá)系統(tǒng)
16.3 融合蛋白載體表達(dá)概述
16.4 融合蛋白的酶解和化學(xué)裂解
16.5 麥芽糖結(jié)合蛋白融合蛋白的表達(dá)及純化
16.6 谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶融合蛋白的表達(dá)及純化
16.7 硫氧還蛋白融合蛋白的表達(dá)和純化
16.8 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的概述
16.9 昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的保存及重組桿狀病毒的產(chǎn)生
16.10 桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)和純化重組蛋白
16.11 概述：蛋白質(zhì)在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)
16.12 用COS細(xì)胞短暫表達(dá)蛋白質(zhì)
16.13 痘苗病毒表達(dá)系統(tǒng)概述
16.14 細(xì)胞系和痘苗病毒貯液的制備
16.15 重組痘苗病毒的制備
16.16 重組痘苗病毒及其產(chǎn)物的鑒定
16.17 用痘苗病毒/T7 RNA聚合酶系統(tǒng)表達(dá)基因
16.18 自主調(diào)節(jié)的四環(huán)素控制基因的誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)
第17章 蛋白質(zhì)磷酸化的分析
17.1 蛋白質(zhì)磷酸化概述
17.2 培養(yǎng)細(xì)胞用32Pi標(biāo)記和用于免疫沉淀的細(xì)胞裂解物的制備
17.3 磷酸氨基酸分析
17.4 分析非標(biāo)記蛋白質(zhì)的磷酸化作用
17.5 酶法檢測磷酸化作用
17.6 用外源性底物分析蛋白激酶
17.7 研究蛋白磷酸化的滲透策略
第18章 生物信息學(xué)
18.1 用BLAST程序組進(jìn)行序列相似性搜索
第19章 蛋白質(zhì)相互作用的分析
19.1 利用相互作用阱/雙雜合系統(tǒng)確定相互作用的蛋白質(zhì)
19.2 與GST融合蛋白結(jié)合的蛋白質(zhì)的親和純化
19.3 基于噬菌體表達(dá)克隆來確認(rèn)相互作用蛋白質(zhì)
附錄
附錄1 試劑和溶液
附錄2 標(biāo)準(zhǔn)測量值和數(shù)據(jù)
附錄3 生物化學(xué)和分子生物學(xué)常用技術(shù)
附錄4 試劑和設(shè)備的供應(yīng)商
附錄5 參考文獻(xiàn)
索引