生物工程專業(yè)實(shí)驗(yàn)

第1篇生物工程實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理/1
第1章生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本理論1
1.1電泳技術(shù)1
1.2PCR技術(shù)2
1.3生物分子濃度的測定3
1.4蛋白質(zhì)的分離純化3

第2章微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本理論4
2.1微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的意義4
2.2微生物的顯微觀察及染色原理4
2.3微生物的純培養(yǎng)7
2.4微生物的生理生化鑒定9
2.5PCR技術(shù)在微生物鑒定上的應(yīng)用9
2.6菌種的保藏9
2.7微生物的生長繁殖10

第3章重組DNA技術(shù)及工程細(xì)胞構(gòu)建11
3.1目的基因的獲取11
3.2DNA片段與載體的連接（以質(zhì)粒載體為例）12
3.3重組基因?qū)胧荏w細(xì)胞12
3.4篩選含有目的基因的受體細(xì)胞13

第4章發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)原理14
4.1發(fā)酵的基本內(nèi)容14
4.2發(fā)酵過程的組成14
4.3發(fā)酵罐的類型15
4.4發(fā)酵罐及培養(yǎng)基的滅菌15
4.5發(fā)酵培養(yǎng)基的配制17
4.6發(fā)酵過程的控制17

第5章常用生物分離實(shí)驗(yàn)技術(shù)及原理18
5.1細(xì)胞破碎18
5.2過濾和離心18
5.3沉淀18
5.4萃取19
5.5膜分離20
5.6色譜20

第6章生物反應(yīng)工程實(shí)驗(yàn)原理22
6.1酶催化反應(yīng)動力學(xué)22
6.2生物反應(yīng)器中氧的傳遞特性26
6.3生物反應(yīng)器的操作動力學(xué)30
6.4連續(xù)式生物反應(yīng)器的流動模型33

第7章酶工程及生物催化原理34
7.1細(xì)胞固定化概述34
7.2細(xì)胞固定化方法34
7.3生物催化概述35

第2篇實(shí)驗(yàn)部分/36
第8章生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)36
實(shí)驗(yàn)8.1常用生物化學(xué)試劑的配制及高壓滅菌36
實(shí)驗(yàn)8.2還原糖的測定——3,5-二硝基水楊酸（DNS）比色法39
實(shí)驗(yàn)8.3基因組DNA的分離提取及電泳檢測41
實(shí)驗(yàn)8.4DNA濃度及純度的測定43
實(shí)驗(yàn)8.5蛋白質(zhì)的SDS-PAGE檢測44
實(shí)驗(yàn)8.6牛乳球蛋白基因的PCR擴(kuò)增及電泳檢測46
實(shí)驗(yàn)8.7HPLC法測定胰島素的氨基酸組成48

第9章微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)50
實(shí)驗(yàn)9.1顯微鏡的使用及微生物形態(tài)的觀察50
實(shí)驗(yàn)9.2細(xì)菌的革蘭氏染色法53
實(shí)驗(yàn)9.3細(xì)菌的莢膜染色法56
實(shí)驗(yàn)9.4細(xì)菌的芽孢染色法58
實(shí)驗(yàn)9.5微生物細(xì)胞大小的測定——測微尺的使用60
實(shí)驗(yàn)9.6顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法）62
實(shí)驗(yàn)9.7培養(yǎng)基的配制與滅菌64
實(shí)驗(yàn)9.8微生物的純培養(yǎng)69
實(shí)驗(yàn)9.9淀粉水解實(shí)驗(yàn)75
實(shí)驗(yàn)9.10糖酵解實(shí)驗(yàn)77
實(shí)驗(yàn)9.11利用16S rDNA基因序列鑒定細(xì)菌79
實(shí)驗(yàn)9.12菌種的保藏82
實(shí)驗(yàn)9.13空氣中微生物的檢測84
實(shí)驗(yàn)9.14大腸桿菌生長曲線的測定87
實(shí)驗(yàn)9.15土壤中解磷微生物的分離純化及鑒定89

第10章基因工程實(shí)驗(yàn)94
實(shí)驗(yàn)10.1原核生物基因組DNA的提取及電泳檢測94
實(shí)驗(yàn)10.2目的基因PCR擴(kuò)增、檢測和純化97
實(shí)驗(yàn)10.3質(zhì)粒DNA的提取及檢測99
實(shí)驗(yàn)10.4重組質(zhì)粒的構(gòu)建101
實(shí)驗(yàn)10.5感受態(tài)細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化103
實(shí)驗(yàn)10.6原核生物總RNA提取與逆轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈反應(yīng)106

第11章發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)109
實(shí)驗(yàn)11.1實(shí)驗(yàn)室常用發(fā)酵罐的基本結(jié)構(gòu)與功能109
實(shí)驗(yàn)11.2發(fā)酵液中生物量的測定111
實(shí)驗(yàn)11.3發(fā)酵培養(yǎng)基的制備及發(fā)酵罐滅菌113
實(shí)驗(yàn)11.4發(fā)酵種子制備及發(fā)酵罐接種116
實(shí)驗(yàn)11.5酵母細(xì)胞補(bǔ)料分批發(fā)酵118
實(shí)驗(yàn)11.6利用大腸桿菌E.coli BL21(DE3)（pET28a-hhdhxf2）工程菌表達(dá)鹵醇脫鹵酶121
實(shí)驗(yàn)11.7固態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)檸檬酸125

第12章生物分離工程實(shí)驗(yàn)129
實(shí)驗(yàn)12.1植物細(xì)胞的破碎及超氧化物歧化酶的浸提129
實(shí)驗(yàn)12.2考馬斯亮藍(lán)G250法測定蛋白質(zhì)含量131
實(shí)驗(yàn)12.3聯(lián)大茴香胺鹽酸鹽法測定超氧化物歧化酶活力133
實(shí)驗(yàn)12.4雙水相萃取相圖的制作136
實(shí)驗(yàn)12.5雙水相系統(tǒng)萃取超氧化物歧化酶138
實(shí)驗(yàn)12.6熱激和鹽析法提取超氧化物歧化酶140
實(shí)驗(yàn)12.7纖維素離子交換柱色譜純化超氧化物歧化酶142

第13章生物反應(yīng)工程實(shí)驗(yàn)144
實(shí)驗(yàn)13.1LB法測定堿性磷酸酶的動力學(xué)參數(shù)144
實(shí)驗(yàn)13.2游離堿性磷酸酶與固定化堿性磷酸酶的動力學(xué)參數(shù)比較147
實(shí)驗(yàn)13.3亞硫酸鈉氧化法測定氣液接觸過程的體積傳質(zhì)系數(shù)KLa150
實(shí)驗(yàn)13.4動態(tài)法測定間歇生物反應(yīng)器的溶氧體積傳質(zhì)系數(shù)KLa152
實(shí)驗(yàn)13.5微生物反應(yīng)器的反應(yīng)性能測定155
實(shí)驗(yàn)13.6連續(xù)攪拌槽式反應(yīng)器停留時(shí)間分布的測定157

第14章酶工程實(shí)驗(yàn)161
實(shí)驗(yàn)14.1溫度和pH值對β-葡萄糖苷酶活力的影響161
實(shí)驗(yàn)14.2纖維素酶活力的測定及酶水解纖維素164
實(shí)驗(yàn)14.3酶偶聯(lián)法測定葡萄糖激酶的活力166
實(shí)驗(yàn)14.4海藻酸鈉包埋法制備固定化α-淀粉酶168
實(shí)驗(yàn)14.5酵母細(xì)胞固定化及催化前手性苯乙酮不對稱還原合成手性醇170
實(shí)驗(yàn)14.6有機(jī)相中脂肪酶的催化轉(zhuǎn)酯化作用172

第15章設(shè)計(jì)性開放實(shí)驗(yàn)174
15.1設(shè)計(jì)性開放實(shí)驗(yàn)教學(xué)目標(biāo)174
15.2設(shè)計(jì)性開放實(shí)驗(yàn)申請及開出程序174
15.3設(shè)計(jì)性開放實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容和基本要求175
15.4設(shè)計(jì)性開放實(shí)驗(yàn)考核方式176
15.5部分設(shè)計(jì)性開放實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目176

第3篇附錄/177
附錄1生物工程實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)則177
附錄2常用緩沖液的配制184
附錄3常用抗生素和酶的配制189
附錄4常用培養(yǎng)基的配制191
附錄5實(shí)驗(yàn)室常用貯存液的配制193
附錄6常用生物質(zhì)理化參數(shù)197

參考文獻(xiàn)200