分子生物學(xué)實驗：實用操作技術(shù)與應(yīng)用案例

前言 上篇 實驗操作技術(shù) 第一章 核酸分析與分子克隆技術(shù) 一、用PCR擴(kuò)增目的DNA片段 二、瓊脂糖凝膠電泳 三、DNA片段的回收 四、用乙醇沉淀法濃縮DNA樣品 五、目的DNA片段的連接 六、感受態(tài)細(xì)胞的制備 七、質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化 八、質(zhì)粒DNA的提取 九、質(zhì)粒的酶切 十、利用Gateway技術(shù)構(gòu)建植物表達(dá)載體 十一、Southern雜交分析 第二章 蛋白質(zhì)分析技術(shù) 一、植物組織總蛋白提取及含量的測定 二、聚丙烯酰胺凝膠電泳 三、Western blotting分析 叫、Far Western blotting分析 五、重組蛋白的表達(dá)和純化技術(shù) 六、蛋白兔抗的制備 七、蛋白互作分析實驗技術(shù) 第三章 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物轉(zhuǎn)基因操作技術(shù) 一、原理 二、實驗操作流程 第四章 基因差異表達(dá)分析技術(shù) 一、抑制消減雜交 二、cDNA芯片雜交 第五章 DNA與蛋白互作分析技術(shù) 一、染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù) 二、凝膠阻滯分析技術(shù) 下篇 應(yīng)用實例 第六章 通路克隆技術(shù)入門載體的改造 一、含有Rubisco小亞基啟動子和葉綠體基質(zhì)定位序列的通路克隆入門載體的構(gòu)建 二、通路克隆入門載體pEN-L4*-PrbcS-*T-GFP-L3*的構(gòu)建 三、通路克隆入門載體pENTR*-T-GFP的構(gòu)建及功能驗證 第七章 用Gateway技術(shù)構(gòu)建目的基因的光誘導(dǎo)型植物表達(dá)載體 一、光誘導(dǎo)型GFP基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建 二、光誘導(dǎo)型Gus基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建 三、光誘導(dǎo)型hps/phi融合基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建 四、擬南芥細(xì)胞質(zhì)型蘋果酸脫氫酶基因AMDH光誘導(dǎo)型植物表達(dá)載體的構(gòu)建 第八章 用Gateway技術(shù)構(gòu)建目的基因的組成型植物表達(dá)載體 一、GFP基因植物組成型表達(dá)載體的構(gòu)建 二、短芽孢桿菌甲醛脫氫酶基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建 三、大豆14-3-3a基因（SGF14a）植物表達(dá)載體的構(gòu)建 第九章 用Gateway技術(shù)構(gòu)建目的基因與報告基因融合植物表達(dá)載體 一、大豆轉(zhuǎn)錄因子GmbH[．H30與GFP融合基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建 二、擬南芥RCA啟動子和熒光素酶基因LUC融合表達(dá)載體的構(gòu)建及應(yīng)用 第十章 用Gateway技術(shù)構(gòu)建目的基因的RNAi干擾植物表達(dá)載體 蠶豆PPlc基因抑制表達(dá)載體的構(gòu)建與應(yīng)用 第十一章 用Gateway技術(shù)構(gòu)建串聯(lián)兩個目的基因表達(dá)盒的植物表達(dá)載體 二羥基丙酮合成酶和二羥基丙酮激酶基因表達(dá)盒串聯(lián)的植物表達(dá)載體構(gòu)建 第十二章 用經(jīng)典的酶切連接技術(shù)構(gòu)建目的基因的植物表達(dá)載體 一、檸檬酸合成酶基因cs光誘導(dǎo)型植物表達(dá)載體pPZP21111-PrbcS刪的構(gòu)建 二、芹菜絲氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶基因的植物表達(dá)載體構(gòu)建 第十三章 利用植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化植物及轉(zhuǎn)基因植物表型分析 一、用GFt，和Gus植物表達(dá)載體產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植物及轉(zhuǎn)基因的整合與表達(dá)分析 二、用植物表達(dá)載體pK2-35S-PrbcS-*T-has/phi轉(zhuǎn)化天竺葵獲得轉(zhuǎn)基因植株及表型分析 三、用植物表達(dá)載體pK-35S-PrbcS-*T-DAK-PROLD-PrbcS-*T-DAS轉(zhuǎn)化擬南芥獲得轉(zhuǎn)基因植株及表型分析 四、用植物表達(dá)載體一pPZP211一PrbcS一cs轉(zhuǎn)化煙草獲得轉(zhuǎn)基因植株及表型分析 五、用植物表達(dá)載體p1300一Surperpromoter-AgSAT轉(zhuǎn)化煙草及轉(zhuǎn)基因植株表型分析 六、利用CS和PEPC的表達(dá)載體產(chǎn)生雙轉(zhuǎn)基因煙草及表型分析- 第十四章 原核表達(dá)載體的構(gòu)建和應(yīng)用 一、惡臭假單胞菌谷胱甘肽一非依賴型甲醛脫氫酶的原核表達(dá)載體的構(gòu)建和應(yīng)用 二、黑大豆醛脫氫酶基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建和應(yīng)用 第十五章 酵母表達(dá)載體的構(gòu)建及應(yīng)用 AtHSFAid基因在酵母中的表達(dá)與功能分析 第十六章 利用ssH cDNA文庫技術(shù)分析基因的差異表達(dá) 一、噴施甲醇的蠶豆葉片中上調(diào)表達(dá)基因的分離與鑒定 二、甲醛脅迫擬南芥葉片中下調(diào)表達(dá)基因的分離與鑒定 第十七章 利用DNA芯片技術(shù)分析基因的差異表達(dá) 一、用擬南芥全基因組芯片雜交分析基因的差異表達(dá) 二、用大豆全基因組芯片雜交分析基因的差異表達(dá) 第十八章 利用免疫共沉淀技術(shù)分析體內(nèi)蛋白與蛋白之間的的相互作用 一、用免疫共沉淀分析鋁脅迫下大豆根中14-3-3蛋白對質(zhì)膜H+-ATPase活性的調(diào)控 二、用免疫共沉淀分析煙草質(zhì)膜H+-ATPase與14-3-3蛋白的互作對干旱脅迫的應(yīng)答 三、用免疫共沉淀分析云南紅梨果皮轉(zhuǎn)錄因子MYB、bHLH和WD40的互作模式 第十九章 利用雙分子熒光技術(shù)分析植物體內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子間的相互作用 在洋蔥表皮細(xì)胞中驗證PyMYB、PybHLH和PyWD40之間的相互模式 第二十章 用：Pulldown和Far Western blot技術(shù)做體外實驗分析蛋白質(zhì)之間的互作 PyMYB、PybHLH和PyWD40重組蛋白之間互作模式分析 第二十一章 用chIP分析植物體內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子和啟動子的結(jié)合 一、云南紅梨果皮MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合花青素結(jié)構(gòu)基因啟動子元件的分析 二、甲醇和乙醇刺激對煙草轉(zhuǎn)錄因子RSG與GA200x1啟動子結(jié)合的影響 第二十二章 利用。EMSA技術(shù)做體外實驗分析轉(zhuǎn)錄因子和基因啟動子元件的結(jié)合 EMSA分析在體外ayMyB與花青素合成結(jié)構(gòu)基因啟動子的結(jié)合 第二十三章 利用PcR技術(shù)篩選擬南芥的T-DNA插入突變體 一、擬南芥SHMIY純合T-DNA插入突變體的篩選 二、擬南芥HY5純合T-DNA插入突變體的篩選 三、擬南芥bHLH30純合T-DNA插入突變體的篩選 參考文獻(xiàn) 附錄 一、常用抗生素貯存液配制方法 二、常用培養(yǎng)基的配制 三、常用菌種的特性 四、常用質(zhì)粒載體圖譜 五、轉(zhuǎn)基因生物表型常見生理生化指標(biāo)的分析方法