生物技術(shù)制藥實驗指南

第一章 實驗室管理和安全準(zhǔn)則
一、實驗室一般要求
二、生物技術(shù)實驗室規(guī)則
三、生物技術(shù)實驗室的安全管理與注意事項
四、實驗室意外事故的緊急處理

第二章 生物技術(shù)實驗常用儀器及操作規(guī)范
一、玻璃器皿
二、塑料制品
三、過濾裝置
四、微量移液器及吸頭
五、pH計
六、天平
七、離心機
八、恒溫箱
九、振蕩設(shè)備
十、超凈工作臺
十一、生物安全柜
十二、純水儀
十三、滅菌設(shè)備
十四、紫外-可見分光光度計
十五、熱循環(huán)儀
十六、電泳儀
十七、凝膠成像系統(tǒng)
十八、流式細(xì)胞儀
十九、超聲細(xì)胞破碎儀
二十、制冰機
二十一、液氮罐
二十二、冰箱
二十三、真空離心濃縮儀
二十四、基因槍
二十五、新一代高通量測序技術(shù)

第三章 顯微觀察技術(shù)
一、普通光學(xué)顯微鏡
二、相差顯微鏡
三、倒置顯微鏡
四、熒光顯微鏡
五、激光掃描共聚焦顯微鏡
六、透射電子顯微鏡
七、掃描電子顯微鏡
實驗一 細(xì)菌顯微形態(tài)特征觀察
實驗二 絲狀真菌顯微形態(tài)特征觀察
實驗三 酵母菌顯微形態(tài)特征觀察
實驗四 酵母細(xì)胞大小和數(shù)量的測定

第四章 緩沖液、培養(yǎng)基的配制及滅菌技術(shù)
一、溶液的配制
二、化學(xué)品和廢棄緩沖液的處理
三、儀器
實驗一 MS培養(yǎng)基的配制
實驗二 LB培養(yǎng)基的配制

第五章 核酸分析技術(shù)
一、儲存
二、純化-除去核酸中的蛋白質(zhì)
三、核酸的定量
四、濃縮沉淀
五、DNA酶切反應(yīng)
六、DNA連接
七、電泳
八、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
實驗一 堿裂解法提取質(zhì)粒DNA
實驗二 DNA的瓊脂糖凝膠電泳
實驗三 細(xì)菌基因組DNA的提取和鑒定
實驗四 釀酒酵母總DNA的提取
實驗五 植物基因組DNA提取
實驗六 動物組織DNA的提取
實驗七 采用Trizol溶液提取細(xì)菌總RNA
實驗八 動物組織mRNA的提取
實驗九 DNA的酶切
實驗十 DNA的連接
實驗十一 脈沖場凝膠電泳（PFGE）
實驗十二 RNA瓊脂糖變性膠電泳分析
實驗十三 真菌ITS序列的PCR擴增
實驗十四 菌落PCR
實驗十五 DD-PCR技術(shù)
實驗十六 實時定量PCR
實驗十七 Southem印跡雜交
實驗十八 Northem雜交技術(shù)
實驗十九 原位雜交

第六章 蛋白分析技術(shù)
一、選擇沉淀
二、蛋白質(zhì)的聚丙烯酰胺凝膠電泳
三、雙向凝膠電泳
四、蛋白濃度檢測
實驗一 植物中葉片蛋白質(zhì)的提取
實驗二 動物組織蛋白質(zhì)的提取
實驗三 蛋白質(zhì)的定量（BCA法）
實驗四 蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳
實驗五 蛋白質(zhì)雙向電泳
實驗六 Western Blotting
實驗七 酶聯(lián)免疫吸附實驗
實驗八 免疫組化實驗

第七章 組織與細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
一、動物組織培養(yǎng)
二、植物組織培養(yǎng)
實驗一 哺乳動物細(xì)胞的原代培養(yǎng)
實驗二 哺乳動物細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
實驗三 哺乳動物細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
實驗四 哺乳動物細(xì)胞的融合
實驗五 兔脾細(xì)胞懸液的制備
實驗六 小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)實驗
實驗七 胡蘿卜愈傷組織的培養(yǎng)
實驗八 植物原生質(zhì)體的制備
實驗九 原生質(zhì)體分離與融合

第八章 微生物培養(yǎng)
一、細(xì)菌培養(yǎng)
二、真核微生物的培養(yǎng)
實驗一 藥植土壤中根際微生物的分離與計數(shù)
實驗二 細(xì)菌生長曲線的測定
實驗三 釀酒酵母海藻酸鈣的細(xì)胞固定化

第九章 轉(zhuǎn)基因技術(shù)
一、細(xì)菌轉(zhuǎn)基因
二、酵母菌轉(zhuǎn)基因
三、植物轉(zhuǎn)基因
四、動物轉(zhuǎn)基因
實驗一 CaCl2法制備感受態(tài)細(xì)胞
實驗二 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
實驗三 電轉(zhuǎn)化法制備細(xì)菌感受態(tài)細(xì)胞
實驗四 基因槍法轉(zhuǎn)化油萊愈傷組織
實驗五 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物遺傳轉(zhuǎn)化
實驗六 逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法制備轉(zhuǎn)基因細(xì)胞
實驗七 顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因小鼠

第十章 誘變技術(shù)
實驗一 大腸桿菌的紫外誘變
實驗二 氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株的篩選

第十一章 生物活性物質(zhì)的分離與檢測
實驗一 抗生素的微生物檢定法
實驗二 牛乳中酪蛋白的制備
實驗三 γ-球蛋白的分離
實驗四 大蒜SOD的分離提取與活力測定
實驗五 滑菇多糖的提取制備和鑒定
實驗六 凝血酶的制備

第十二章 綜合實驗
實驗一 基因組DNA文庫的構(gòu)建
實驗二 突變細(xì)胞基因差異表達(dá)的研究
附錄
主要參考文獻(xiàn)