分子生物學(xué)與基因組學(xué)

引言
第一版前言
致謝
1 什么是分子生物學(xué)？
　1.1 分子生物學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)：讓初學(xué)者認(rèn)識(shí)分子世界
　1.2 分子生物學(xué)基本要求
　1.3 實(shí)驗(yàn)室安全
2 基本方法介紹
　2.1 核酸的差異
　2.2 核酸沉淀濃縮
　　2.2.1 乙醇沉淀法
　　2.2.2 濃縮裝置
　　2.2.3 冷凍干燥
　　2.2.4 鹽析
　2.3 核酸純化
　　2.3.1 酚氯仿抽提純化法
　　2.3.2 聚乙二醇沉淀法
　　2.3.3 蛋白結(jié)合濾膜純化法
　　2.3.4 陰離子交換柱純化法
　　2.3.5 玻璃乳純化法
　　2.3.6 氯化銫密度梯度離心法
　　2.3.7 透析法
　2.4 核酸濃度測(cè)定
　　2.4.1 分光光度計(jì)法
　　2.4.2 瓊脂糖凝膠電泳法
　　2.4.3 點(diǎn)量化法
　　2.4.4 熒光定量法
　　2.4.5 核酸檢測(cè)計(jì)法
　　2.4.6 酶標(biāo)志法
　2.5 DNA制備方法
　　2.5.1 質(zhì)粒DNA的小量制備
　　2.5.2 質(zhì)粒DNA的大量制備
　　2.5.3 細(xì)菌培養(yǎng)基
　　2.5.4 噬菌體DNA的制備
　　2.5.5 利用輔助噬茵體制備單鏈DNA
　　2.5.6 基因組DNA制備
3 分子生物學(xué)工具
　3.1 限制性酶
　　3.1.1 命名法
　　3.1.2 活性測(cè)定
　　3.1.3 限制性酶切反應(yīng)
　　3.1.4 限制性酶切難點(diǎn)
　　3.1.5 限制性酶切指南
　3.2 凝膠
　　3.2.1 瓊脂糖凝膠
　　3.2.2 瓊脂糖凝膠中的DNA片段回收
　　3.2.3 聚丙烯酰胺凝膠
　　3.2.4 聚丙烯酰胺凝膠中的DNA片段回收
　　3.2.5 脈沖場(chǎng)凝膠電泳
　　3.2.6 毛細(xì)管電泳
　3.3 印跡法
　　3.3.1 Sotlthern印跡法
　　3.3.2 Northern印跡法
　　3.3.3 點(diǎn)印跡法和縫印跡法
4 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
　4.1 標(biāo)準(zhǔn)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
　4.2 改進(jìn)的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
　　4.2.1 巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
　　4.2.2 多重聚合酶鏈反應(yīng)
　　4.2.3 長(zhǎng)片段聚合酶鏈反應(yīng)
　4.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的應(yīng)用
　　4.3.1 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
　　4.3.2 cDNA末端的快速擴(kuò)增
　　4.3.3 相同產(chǎn)物擴(kuò)增
　　4.3.4 經(jīng)典定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
　　4.3.5 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
　　4.3.6 反向聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
　　4.3.7 Biotin?RAGE聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
　　4.3.8 改良引物誘變
　　4.3.9 擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)
　　4.3.10 原位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
　　4.3.11 循環(huán)測(cè)序
　　4.3.12 cDNA合成
　　4.3.13 單細(xì)胞聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
5 RNA
　5.1 RNA酶滅活
　5.2 RNA提取方法
　　5.2.1 一步法
　　5.2.2 乙基苯基聚乙二醇裂解法
　　5.2.3 基本信息
　　5.2.4 RNA濃度測(cè)定
　5.3 mRNA分離方法
　　5.3.1 購(gòu)買RNA
　5.4 逆轉(zhuǎn)錄：cDNA合成
　5.5 體外轉(zhuǎn)錄：RNA合成
　5.6 RNA干擾
6 克隆DNA片段
　6.1 克隆的基本要素
　　6.1.1 載體
　　6.1.2 DNA片段
　　6.1.3 補(bǔ)平反應(yīng)
　　6.1.4 DNA定量
　　6.1.5 連接
　　6.1.6 克隆PCR產(chǎn)物
　　6.1.7 用重組酶體系克隆
　6.2 選擇克隆載體
　　6.2.1 質(zhì)粒
　　6.2.2 噬菌體
　　6.2.3 柯斯質(zhì)粒
　　6.2.4 P1人工染色體及細(xì)菌人工染色體
　　6.2.5 酵母人工染色體
　6.3 選擇細(xì)菌
　6.4 制備感受態(tài)細(xì)胞與轉(zhuǎn)化
　　6.4.1 氯化鈣法
　　6.4.2 氯化銣法
　　6.4.3 TSS法
　　6.4.4 電轉(zhuǎn)
　　6.4.5 效價(jià)檢測(cè)
　6.5 克隆的相關(guān)問(wèn)題
　6.6 克隆的保存
7 雜交：如何檢測(cè)到DNA
　7.1 制備探針
　　7.1.1 制備標(biāo)記探針的方法
　7.2 雜交
　　7.2.1 雜交緩沖液
　　7.2.2 雜交反應(yīng)體系
　　7.2.3 雜交溫度
　　7.2.4 洗滌
　7.3 標(biāo)記DNA的驗(yàn)證
　　7.3.1 放射自顯影技術(shù)
　　7.3.2 非放射性檢測(cè)方法
　7.4 重組DNA庫(kù)的篩選
　　7.4.1 DNA庫(kù)板的制備
　　7.4.2 膜的轉(zhuǎn)移
　　7.4.3 膜的雜交
　　7.4.4 膜的曝光
　　7.4.5 克隆探測(cè)
　　7.4.6 今后對(duì)庫(kù)的篩選
　7.5 雙雜交系統(tǒng)
8 DNA分析
　8.1 測(cè)序
　　8.1.1 放射性測(cè)序
　　8.1.2 非放射性測(cè)序與自動(dòng)測(cè)序單位
　　8.1.3 袖珍型測(cè)序
　　8.1.4 焦磷酸測(cè)序法
　　8.1.5 測(cè)序特性：八聚體
　8.2 分析DNA突變的方法
　　8.2.1 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性
　　8.2.2 單鏈構(gòu)象多態(tài)性
　　8.2.3 變性梯度凝膠電泳
　　8.2.4 時(shí)相溫度梯度電泳
　　8.2.5 異源雙鏈核酸分析
　　8.2.6 擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)
　　8.2.7 錯(cuò)配酶切
　　8.2.8 截?cái)嗟鞍讬z測(cè)
9 DNA序列功能的研究
　9.1 組織內(nèi)轉(zhuǎn)錄研究
　　9.1.1 核糖核酸酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)
　　9.1.2 實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)
　　9.1.3 原位雜交
　　9.1.4 染色體熒光原位雜交
　　9.1.5 原位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
　　9.1.6 微陣列
　9.2 突變
　9.3 體外翻譯
　9.4 表達(dá)系統(tǒng)
　　9.4.1 細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)
　　9.4.2 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)
　　9.4.3 其他表達(dá)系統(tǒng)
　　9.4.4 哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的異源表達(dá)系統(tǒng)
　　9.4.5 轉(zhuǎn)染方法
　　9.4.6 多基因共轉(zhuǎn)染
　　9.4.7 瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
　　9.4.8 報(bào)告基因
　9.5 轉(zhuǎn)基因小鼠
　　9.5.1 轉(zhuǎn)基因方法
　9.6 轉(zhuǎn)基因表達(dá)調(diào)控
　　9.6.1 四環(huán)素基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)
　　9.6.2 蛻皮素基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)
　9.7 基因治療
　9.8 基因組學(xué)
10 計(jì)算機(jī)應(yīng)用
　10.1 重要事項(xiàng)
　10.2 實(shí)踐中存在的問(wèn)題
11 職業(yè)生涯規(guī)劃建議：針對(duì)青年研究者的馬基雅維利短期課程
12 結(jié)束語(yǔ)
附錄1
圖標(biāo)
標(biāo)準(zhǔn)溶液和細(xì)菌培養(yǎng)基
　溶液
　細(xì)菌培養(yǎng)基
術(shù)語(yǔ)表
附錄2
供應(yīng)商
推薦文獻(xiàn)
休閑讀物
索引