第1章 重組蛋白分離與分析概論1 11 重組蛋白質概論1 12 重組蛋白質的設計及純化技巧2 13 純化目標5 131 產品的純度和安全性5 132 終產物成本5 14 純化策略6 15 純化過程的放大7 16 對純化的綜合評價8 17 合理設計純化工藝8 主要參考文獻11 第2章 重組蛋白純化的一般工藝及方法14 21 引言14 22 用做純化的主要蛋白質性質14 221 蛋白質大小15 222 蛋白質形狀15 223 蛋白質荷電性15 224 蛋白質等電點16 225 蛋白質疏水性16 226 蛋白質溶解度16 227 蛋白質密度16 228 蛋白質與配體結合能力16 229 蛋白質與金屬螯合能力16 2210 蛋白質的某些特殊性質17 23 純化分離技術18 231 發(fā)酵液的預處理18 232 細胞分離技術20 233 細胞破碎技術24 234 生物物質的分離純化技術24 24 純化方案中純化順序的選擇76 25 固定相的選擇77 26 方案的有效性分析78 主要參考文獻79 第3章 細胞破碎的物理及化學方法81 31 前言81 32 破碎率的評價81 33 破碎方法82 331 球磨勻漿法83 332 轉子-定子式勻漿機勻漿87 333 高壓勻漿機勻漿90 334 超聲波破碎94 335 其他物理方法95 336 細胞自溶98 337 酶解法101 338 干燥法102 339 其他化學溶劑法103 3310 細胞滲透法103 3311 通過細胞自身調控體系進行細胞的破碎104 34 總結104 主要參考文獻106 第4章 純化過程中如何防止蛋白水解108 41 天然及變性蛋白的水解108 411 蛋白酶的生化作用108 412 蛋白酶的種類和蛋白酶的作用機理109 413 蛋白酶的特異性及對降解底物的敏感性110 42 用作宿主細胞的真核、原核生物體內的蛋白酶111 421 大腸桿菌 (Ecoli）內的蛋白酶111 422 枯草桿菌 (Bacillus subtilis）產生的蛋白酶112 423 酵母中的蛋白酶113 424 哺乳動物細胞內的蛋白酶115 43 蛋白酶的鑒定116 44 防止重組蛋白水解的策略117 441 基因調控法118 442 去除蛋白酶的策略121 443 抑制蛋白酶的策略122 主要參考文獻125 第5章 從重組蛋白質中除去N末端甲硫氨酸的方法127 51 引言127 511 蛋白質轉譯后的修飾及鑒定分析127 512 甲硫氨酸氨基肽酶的特性131 513 胞質間重組蛋白的加工131 514 與多余甲硫氨酸相關的非均勻性和免疫原性132 52 去除末端甲硫氨酸的方法133 521 體內去除末端甲硫氨酸的方法133 522 去除末端甲硫氨酸的體外方法135 主要參考文獻137 第6章 藥用蛋白質的純化141 61 引言141 62 蛋白質純化過程中的質量控制142 621 蛋白質生物功效142 622 蛋白質結構143 623 蛋白質純度的測定143 624 終產品中痕量雜質的分析143 63 蛋白質純化準則143 631 初始原料物質的濃度和雜質性質144 632 非蛋白雜質的去除145 633 DNA的去除145 634 熱源的去除147 635 病毒的去除149 636 外源蛋白的去除150 64 方案的有效性151 65 結論152 主要參考文獻153 第7章 利用工程修飾改進重組蛋白的純化分離157 71 引言157 72 引入切割位點的重組工程蛋白158 73 促進活性蛋白分離的工程技術159 731 形成包涵體以穩(wěn)定蛋白質160 732 基團修飾以利天然活性蛋白質生產162 74 簡化純化工藝的蛋白質工程163 741 改進色譜性能的蛋白質工程164 742 構建工程位點使蛋白質具有免疫親和性能164 743 構建工程位點使蛋白質具有離子交換吸附性能166 744 構建工程位點使蛋白質具有金屬親和吸附性能168 745 低成本純化蛋白工程171 746 改進分析方法的蛋白質工程171 75 結論172 主要參考文獻173 第8章 大腸桿菌表達的重組蛋白的分離純化175 81 引言175 82 大腸桿菌表達的分泌型重組蛋白的純化分離178 821 純化方法179 822 實例180 823 分泌型重組蛋白的純化分離總結199 83 大腸桿菌表達的包涵體蛋白的純化分離200 831 確定包涵體量201 832 重組蛋白穩(wěn)定性檢測204 833 純化方案206 834 包涵體的組成分析210 835 包涵體的結構214 836 影響包涵體形成的因素214 837 包涵體蛋白純化實例216 838 包涵體蛋白純化總結221 主要參考文獻221 第9章 酵母表達的重組蛋白的分離純化225 91 引論225 92 釀酒酵母或面包酵母表達的重組蛋白的分離純化227 921 釀酒酵母或面包酵母表達的胞內蛋白質的分離純化228 922 釀酒酵母或面包酵母分泌表達的蛋白質的分離純化232 923 結論234 924 釀酒酵母或面包酵母表達的重組蛋白的研究展望235 93 Pichia pastoris生產的重組蛋白的分離純化235 931 背景235 932 Pichia pastoris表達體系的發(fā)展236 933 Ppastoris表達的胞內外源蛋白239 934 Pichia pastoris分泌的外源蛋白的分離純化242 935 討論248 主要參考文獻249 第10章 單克隆抗體的純化252 101 引言252 102 單克隆抗體制備過程253 103 抗體的物理特征257 104 單克隆抗體純化工藝258 1041 澄清258 1042 沉淀260 1043 分離260 1044 非蛋白雜質的去除271 附錄 鼠源性病毒檢測273 主要參考文獻274
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