基因克隆技術在制藥中的應用

上篇技術篇
第一章 基因克隆技術概述1
第一節(jié)基因克隆技術1
一、基因克隆技術的誕生和興起1
二、基因克隆技術的特點與步驟3
第二節(jié)基因克隆技術早期開創(chuàng)性研究成就5
第二章 基因克隆技術制藥中常用的工具酶8
第一節(jié)限制性核酸內切酶8
一、限制酶的發(fā)現(xiàn)8
二、限制酶的類型9
三、限制酶的命名10
四、Ⅱ型限制酶的特性10
五、DNA的單酶切與限制片段末端連接13
第二節(jié)DNA連接酶14
一、DNA連接酶連接作用的特點14
二、基因工程中常用的連接酶14
三、DNA連接酶連接作用的分子機理15
第三節(jié)DNA聚合酶16
一、大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ16
二、Klenow大片段酶18
三、T4噬菌體DNA聚合酶19
四、經(jīng)修飾的T7噬菌體DNA聚合酶19
五、TaqDNA聚合酶及AmpliTaqTMDNA聚合酶20
六、反轉錄酶20
第四節(jié)DNA修飾酶21
一、末端脫氧核苷酸轉移酶21
二、堿性磷酸酶21
三、T4噬菌體多核苷酸激酶22
第五節(jié)單鏈核酸內切酶22
一、S1核酸酶22
二、Bal31核酸酶23
第六節(jié)核酸外切酶24
一、核酸外切酶Ⅶ24
二、核酸外切酶Ⅲ24
三、λ核酸外切酶25
第三章 基因克隆技術制藥常用質粒載體26
第四章 基因克隆技術制藥常用噬菌體載體43
第五章 基因工程藥物目的基因制取65
第六章 目的基因與克隆載體的體外重組83
第七章 重組克隆載體引入受體細胞95
第八章 目的重組克隆的篩選、鑒定與分析104
第九章 目的基因在宿主細胞中的表達127
第十章 基因克隆技術制藥概述151
下篇 應用篇
第十一章 生物藥物基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達163
第十二章 生物藥物基因的克隆及其在酵母菌中的表達188
第十三章 生物藥物基因的克隆及其在昆蟲中的表達194
第十四章 生物藥物基因的克隆及其在動物細胞中的表達200
第十五章 基因工程菌和工程細胞的培養(yǎng)與發(fā)酵215
第十六章 基因工程藥物的分離純化229
第十七章 基因工程藥物的分析與檢驗241
附錄1 干擾素效價測定(細胞病變抑制法)263
附錄2 重組人白細胞介素2效價測定(CTLL2依賴細胞株/MTT比色法）265
附錄3 EPO體內活性測定(網(wǎng)織紅細胞法)266
附錄4 EPO純度測定(HPLCSEC法)267
附錄5 CHO細胞蛋白殘留量測定(ELISA法)268
附錄6 rhGCSF效價測定(NFS60依賴株/MTT比色法)269
主要參考文獻270