生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗技術(shù)

第一章 生化實(shí)驗基本技術(shù)
第一節(jié) 分光光度法
一、紫外及可見分光光度法
二、熒光光譜分析法
第二節(jié) 層析法
一、紙層析法
二、薄層層析法
三、離子交換層析法
四、凝膠層析法
第三節(jié) 電泳法
一、電泳方法的分類
二、電泳技術(shù)的應(yīng)用
第四節(jié) 離心分離法
一、原理與計算
二、制備離心技術(shù)
三、分析超離心
本章參考文獻(xiàn)
第二章 蛋白質(zhì)的分子組成、結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)分析
第一節(jié) 概述
一、蛋白質(zhì)分子的基本概念
二、蛋白質(zhì)的分離和純化
三、蛋白質(zhì)的定量
四、蛋白質(zhì)純度的鑒定
五、蛋白質(zhì)分子的序列分析
第二節(jié) 實(shí)驗項目
實(shí)驗一蛋白質(zhì)的定量測定
Ⅰ.Kjeldahl定氮法
Ⅱ．Lowry酚試劑法
Ⅲ．紫外光譜吸收法
Ⅳ．考馬斯亮藍(lán)染色法
實(shí)驗二生物體液和組織蛋白質(zhì)的分離和鑒定
Ⅰ.血清IgG的分離純化（離子交換層析法）
Ⅱ．細(xì)胞色素c的制備及鑒定
實(shí)驗三血清蛋白質(zhì)的電泳分離
Ⅰ.醋酸纖維薄膜電泳
Ⅱ．聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳
實(shí)驗四蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析
Ⅰ.等電聚焦電泳法測定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)
Ⅱ．SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量
實(shí)驗五蛋白質(zhì)的分子篩層析分離及相對分子質(zhì)量測定
Ⅰ.血紅蛋白、DNP-魚精蛋白混合物的分離（分子篩層析法）
Ⅱ．分子篩層析測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量
實(shí)驗六蛋白質(zhì)分子組成及末端氨基酸分析
Ⅰ.DNS法分析蛋白質(zhì)氨基酸組分
Ⅱ．蛋白質(zhì)及多肽的N-末端氨基酸分析（FDNB法）
Ⅲ．蛋白質(zhì)及多肽的C-末端氨基酸分析（羧肽酶法）
實(shí)驗七肽的N-末端測定及其順序分析（DABITC／PITC雙偶合法）
實(shí)驗八固定化蛋白質(zhì)的免疫生化鑒定（Western印跡）
本章參考文獻(xiàn)
第三章 核酸的分子組成及理化性質(zhì)分析
第一節(jié) 概述
一、核酸的分子組成與結(jié)構(gòu)
二、核酸的理化性質(zhì)
三、核酸的制備和含量測定
第二節(jié) 實(shí)驗項目
實(shí)驗九動物肝臟RNA的制備（苯酚法）
實(shí)驗十小牛胸腺DNA的制備（濃鹽法）
實(shí)驗十一核酸的含量測定
Ⅰ.紫外吸收法測定核酸含量
Ⅱ．定磷法測定核酸含量
Ⅲ．地衣酚法測定RNA含量
Ⅳ．二苯胺顯色法測定DNA含量
實(shí)驗十二電泳法分離RNA和DNA
Ⅰ.瓊脂糖凝膠電泳分離DNA
Ⅱ．聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）分離RNA
實(shí)驗十三DNA堿基成分分析及含量測定
本章參考文獻(xiàn)
第四章 酶作用及酶反應(yīng)動力學(xué)分析
第一節(jié) 概述
一、酶反應(yīng)動力學(xué)分析
二、酶的抑制作用動力學(xué)
三、影響酶反應(yīng)速率的其他因素
四、酶試驗
第二節(jié) 實(shí)驗項目
實(shí)驗十四蔗糖酶與淀粉酶作用的專一性
實(shí)驗十五胰蛋白酶的親和層析法純化
實(shí)驗十六酸性磷酸酶KM及Vmax值測定
附一、O．1N碘溶液的配制及標(biāo)定
二、0．1N硫代硫酸鈉溶液的配制及標(biāo)定
實(shí)驗十七磷酸鹽及氟化鈉對酸性磷酸酶的抑制作用
實(shí)驗十八乳酸脫氫酶同工酶分析
本章參考文獻(xiàn)
第五章 物質(zhì)代謝及其激素調(diào)節(jié)
第一節(jié) 概述
一、物質(zhì)代謝定義
二、研究目的、材料
三、研究方法
四、實(shí)驗安排
第二節(jié) 實(shí)驗項目
實(shí)驗十九胰島素及腎上腺素對血糖濃度的影響
附Nelson-Somogyi法測定血糖濃度
實(shí)驗二十飽食、饑餓及激素對肝糖元含量的影響
實(shí)驗二十一三羧酸循環(huán)中間產(chǎn)物對酵母耗氧率的影響（Warburg氏呼吸儀示教）
附Warburg氏呼吸儀的構(gòu)造和使用
實(shí)驗二十二脂類的薄層層析
實(shí)驗二十三酮體的生成與利用
實(shí)驗二十四血清低密度脂蛋白與極低密度脂蛋白的比濁測定
附標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
實(shí)驗二十五血清脂蛋白的醋酸纖維薄膜電泳
實(shí)驗二十六轉(zhuǎn)氨基作用
實(shí)驗二十七血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的測定（賴氏法）
實(shí)驗二十八生物氧化與電子傳遞
本章參考文獻(xiàn)
第六章 分子生物學(xué)基本實(shí)驗技術(shù)
第一節(jié) 概述
一、核酸是遺傳物質(zhì)
二、基因與基因組
三、DNA復(fù)制、損傷與修復(fù)
四、基因表達(dá)和遺傳密碼
五、基因表達(dá)的調(diào)控
六、分子生物學(xué)實(shí)驗技術(shù)相關(guān)知識
第二節(jié) 實(shí)驗項目
實(shí)驗二十九質(zhì)粒DNA的提取
實(shí)驗三十質(zhì)粒DNA酶切及瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定
實(shí)驗三十一質(zhì)粒DNA的分子雜交
實(shí)驗三十二mRNA的提取與純化
實(shí)驗三十三血液標(biāo)本中DNA的提取
實(shí)驗三十四脈沖電場凝膠電泳
實(shí)驗三十五RNA分析--Northern雜交
實(shí)驗三十六聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)體外擴(kuò)增DNA
實(shí)驗三十七反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTI_PCR）
實(shí)驗三十八cDNA文庫的構(gòu)建
實(shí)驗三十九PCR-RFLP法測定CYP2C19ml等位基因
實(shí)驗四十等位基因特異擴(kuò)增法分析基因中單堿基突變
實(shí)驗四十一利用PCR差異顯示mRNA
本章參考文獻(xiàn)
附錄
一、硫酸銨飽和度計算表
二、緩沖溶液的配制
三、常見蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量參考值
四、常見蛋白質(zhì)等電點(diǎn)參考值
五、實(shí)驗誤差
六、實(shí)驗報告
七、實(shí)驗注意事項及應(yīng)急處理