最新分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

序
前言
第1章 DNA與蛋白質(zhì)相互關(guān)系
1.1 細(xì)胞核蛋白質(zhì)的提取
1.1.1 細(xì)胞核蛋白質(zhì)的提取
1.1.2 細(xì)胞核提取物的快速制備法
1.2 凝膠滯后實(shí)驗(yàn)
1.2.1 凝膠滯后實(shí)驗(yàn)
1.2.2 超級(jí)凝膠電泳
1.3 干擾實(shí)驗(yàn)
1.3.1 甲基化干擾實(shí)驗(yàn)
1.3.2 尿嘧啶干擾實(shí)驗(yàn)
1.4 脫氧核糖核酸酶Ⅰ足跡分析
1.5 隨機(jī)PCR
1.5.1 寡核苷酸的設(shè)計(jì)與合成
1.5.2 寡核苷酸的純化
1.5.3 探針標(biāo)記
1.5.4 凝膠滯后實(shí)驗(yàn)純化探針
1.5.5 特異結(jié)合序列的克隆與序列分析
1.6 核酸-蛋白質(zhì)雜交實(shí)驗(yàn)
1.6.1 電泳及電轉(zhuǎn)移
1.6.2 標(biāo)記探針
1.6.3 蛋白質(zhì)變性、復(fù)性
1.6.4 雜交及放射自顯影
參考文獻(xiàn)
第2章 cDNA文庫構(gòu)建及目的基因的篩選
2.1 cDNA第一條鏈的合成
2.1.1 cDNA第一條鏈合成的策略
2.1.2 cDNA第一條鏈合成的操作步驟
2.2 cDNA第二條鏈的合成
2.2.1 置換合成法
2.2.2 PCR法
2.3 cDNA克隆的其他策略
2.3.1 加尾載體作引物引導(dǎo)cDNA合成——定向克隆
2.3.2 Okayama-Berg克隆法——定向克隆
2.3.3 末端加尾直接克隆——非定向克隆
2.3.4 加接頭直接克隆——非定向克?。p鏈cDNA末端無酶切位點(diǎn)）
2.3.5 加接頭克隆——定向克?。p鏈cDNA一端帶酶切位點(diǎn)）
2.3.6 加連接于克隆——非定向克隆（雙鏈cDNA末端無酶切位點(diǎn)）
2.3.7 加連接子克隆——定向克?。p鏈cDNA一個(gè)末端帶有酶切位點(diǎn)）
2.3.8 PCR產(chǎn)物的直接克隆——非定向克隆
2.3.9 PCR產(chǎn)物的黏瑞克隆法——定向克?。▋蓚€(gè)PCR引物均帶酶切位點(diǎn)）
2.3.10 無連接酶克隆法
2.4 重組子的篩選與鑒定
2.4.1 根據(jù)遺傳表型篩選
2.4.2 分析重組子結(jié)構(gòu)特征的篩選法
2.5 構(gòu)建cDNA文庫新方法
2.5.1 減數(shù)cDNA文庫
2.5.2 標(biāo)準(zhǔn)化cDNA文庫
2.6 mRNA差示顯示技術(shù)
2.6.1 基本原理和方法
2.6.2 優(yōu)化反應(yīng)條件
2.6.3 差異顯示技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用
2.6.4 差異顯示技術(shù)存在的問題及改良措施
2.6.5 差異顯示技術(shù)與相關(guān)方法的比較
2.6.6 差異顯示技術(shù)的展望
2.7 人類基因組計(jì)劃及后基因組計(jì)劃
2.7.1 物理圖譜的制作
2.7.2 測(cè)序及尋找新的功能因子
2.7.3 人類后基因組計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
第3章 抗體工程
3.1 基因工程抗體的免疫學(xué)基礎(chǔ)
3.1.1 免疫應(yīng)答
3.1.2 抗體的分子結(jié)構(gòu)和功能
3.1.3 抗體基因的DNA重排
3.1.4 抗體庫的產(chǎn)生
3.1.5 抗原抗體的結(jié)合
3.2 噬菌體表面表達(dá)技術(shù)與噬菌體抗體
3.3 基因工程重組抗體——Fab抗體
3.4 基因工程重組抗體——單鏈抗體scFv
3.5 Fab段抗體和scFv單鏈抗體表達(dá)產(chǎn)物的純化和鑒定
3.6 重組抗體全免疫球蛋白基因的表達(dá)
參考文獻(xiàn)
第4章 絲狀噬菌體表面顯示技術(shù)的基本原理和應(yīng)用
第5章 聚合酶鏈反應(yīng)
第6章 實(shí)用DNA突變技術(shù)
第7章 外源基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)
第8章 DNA序列測(cè)定
第9章 蛋白質(zhì)的表達(dá)
第10章 蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的研究策略
第11章 生物芯片技術(shù)
第12章 生物信息學(xué)
附錄1 實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)的若干問題
附錄2 常用溶液與配制 【媒體評(píng)論】